phostensin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407125

Descripción general

PPP1R18 codifica la phostensina, una subunidad reguladora asociada a la actina que ayuda a localizar la actividad de la proteína fosfatasa 1 (PP1) en el citoesqueleto cortical. Al acoplar PP1 a la actina filamentosa, la phostensina contribuye al control de la dinámica de los filamentos de actina, la forma celular y la señalización dependiente de la adhesión, con efectos posteriores sobre la motilidad celular y la función de las células inmunitarias. Esta función de andamiaje para PP1 vincula a PPP1R18 con procesos de remodelación dependientes de la fosforilación que coordinan la organización del citoesqueleto y los complejos de señalización próximos a la membrana. La desregulación del direccionamiento de fosfatasas y del remodelado de la actina suele ser relevante para los fenotipos de migración e invasión de células cancerosas, así como para procesos inflamatorios y asociados al sistema inmunitario.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO phostensin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PPP1R18 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PPP1R18 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PPP1R18 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína phostensin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PPP1R18 para la investigación de la señalización de phostensin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PPP1R18 críticos para la función de phostensin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PPP1R18 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido phostensin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido phostensin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PPP1R18. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR phostensin (h) y el plásmido HDR phostensin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PPP1R18 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PPP1R18 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.