PHOSPHO1 Lentiviral Activation Particles (m): sc-433594-LAC

Phospho1 kodiert PHOSPHO1, eine zytosolische Phosphatase, die in mineralisierenden Geweben angereichert ist und Phosphoethanolamin sowie Phosphocholin hydrolysiert, um anorganisches Phosphat für die durch Matrixvesikel vermittelte Hydroxylapatitbildung bereitzustellen. PHOSPHO1 wirkt zusammen mit extrazellulären Nukleotid-Pyrophosphatasen und alkalischen Phosphatasen, um das lokale Phosphat-/Pyrophosphat-Gleichgewicht zu regulieren, das die Biomineralablagerung steuert. In Mausmodellen stört eine veränderte PHOSPHO1-Aktivität die osteoblastengetriebene Skelettmineralisierung, was diesen Signalweg mit beeinträchtigter Knochenbildung und Phänotypen der Mineraldichte in Verbindung bringt. Diese Biologie macht PHOSPHO1 zu einem relevanten Ansatzpunkt für die Untersuchung von Osteogenese-Programmen, der Matrixvesikelbiologie und der Phosphathomöostase in der muskuloskelettalen Forschung.

PHOSPHO1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Phospho1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

PHOSPHO1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Phospho1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen PHOSPHO1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Phospho1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.