PH-4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-409966

Descripción general

P4HTM codifica la proteína transmembrana prolil 4-hidroxilasa (PH-4), una dioxigenasa asociada al retículo endoplásmico que cataliza la hidroxilación de prolina en sustratos selectos, vinculando la disponibilidad de oxígeno y de cofactores metabólicos con la modificación posraduccional de proteínas. Como miembro de la familia de las prolil 4-hidroxilasas, PH-4 está en posición de influir en el plegamiento, la estabilidad y los procesos de control de calidad de las proteínas dentro de la vía secretora, con efectos posteriores sobre las respuestas celulares al estrés y la proteostasis. La actividad de P4HTM se ha relacionado con la biología de detección de oxígeno y la regulación de la señalización sensible a la hipoxia, integrándose con vías que moldean la adaptación celular a la reducción de la tensión de oxígeno. Estudios genéticos y funcionales han implicado a P4HTM en fenotipos relevantes para enfermedad que afectan el neurodesarrollo y la homeostasis metabólica, lo que lo convierte en una diana para estudios mecanísticos en sistemas celulares humanos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PH-4 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen P4HTM en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del P4HTM junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de P4HTM tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PH-4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en P4HTM para la investigación de la señalización de PH-4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de P4HTM críticos para la función de PH-4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de P4HTM para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PH-4 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PH-4 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus P4HTM. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PH-4 (h) y el plásmido HDR PH-4 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología P4HTM para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana P4HTM definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.