Plásmido CRISPR de Activación (h) PGD synthase: sc-405437-ACT

El gen humano **HPGDS** codifica la **prostaglandina D sintasa hematopoyética** (PGD sintasa), una enzima dependiente de glutatión que convierte la prostaglandina H2 en prostaglandina D2 (PGD2). La PGD2 es un mediador lipídico bioactivo que señaliza a través de los receptores DP1/DP2 y se metaboliza posteriormente a prostaglandinas ciclopentenonas, lo que vincula la actividad de HPGDS con el metabolismo de eicosanoides, la señalización inflamatoria y programas celulares sensibles al estado redox. La expresión de HPGDS es destacada en linajes inmunitarios y mieloides, y se ha estudiado en el contexto de la inflamación alérgica, las respuestas inmunitarias de las vías respiratorias y de la piel, y procesos neuroinflamatorios. Las alteraciones en el flujo de la vía de la PGD2 pueden influir en el reclutamiento de leucocitos, las redes de citocinas y la remodelación tisular, lo que convierte a HPGDS en un nodo útil para estudios mecanísticos de fenotipos de enfermedad asociados a la inflamación.

PGD synthase El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HPGDS sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PGD synthase El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HPGDS en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HPGDS, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PGD synthase. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HPGDS y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PGD synthase en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PGD synthase en células tumorales con expresión de HPGDS silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.