PFK-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401023

Descripción general

PFKM codifica la isoforma muscular de la fosfofructoquinasa-1 (PFK-1), una enzima limitante de la velocidad de la glucólisis que cataliza la conversión dependiente de ATP de fructosa-6-fosfato en fructosa-1,6-bisfosfato. Como punto clave de control del flujo glucolítico, la PFK-1 integra la regulación alostérica del estado energético celular y de metabolitos para coordinar el uso de glucosa con la demanda de ATP. La actividad de PFKM influye en el metabolismo central del carbono, la producción de lactato y vías biosintéticas posteriores acopladas a programas proliferativos y de adaptación al estrés. La alteración genética de PFKM se asocia con la enfermedad por almacenamiento de glucógeno tipo VII (enfermedad de Tarui) y se utiliza para investigar cómo una glucólisis alterada contribuye a la disfunción metabólica y a fenotipos celulares relevantes para la biología neuromuscular y hematológica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PFK-1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PFKM en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PFKM junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PFKM tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PFK-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PFKM para la investigación de la señalización de PFK-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PFKM críticos para la función de PFK-1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PFKM para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PFK-1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PFK-1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PFKM. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PFK-1 (h) y el plásmido HDR PFK-1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PFKM para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PFKM definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.