Plasmide CRISPR/Cas9 KO Peroxin 10 (h): sc-406226

Présentation

PEX10 code la péroxine 10, une ligase E3 ubiquitine à doigt RING ancrée dans la membrane des péroxysomes, indispensable à la biogenèse des péroxysomes et à l’import des protéines de la matrice. En tant qu’élément de la machinerie de ubiquitination péroxysomale avec PEX2 et PEX12, PEX10 contribue à réguler le recyclage du récepteur d’import PEX5 et soutient des voies métaboliques péroxysomales, notamment la β‑oxydation des acides gras à très longue chaîne et l’homéostasie des espèces réactives de l’oxygène. La perturbation de PEX10 altère l’assemblage des péroxysomes et compromet le métabolisme lipidique ainsi que l’équilibre rédox, des processus centraux des réponses cellulaires au stress et de la communication entre organites. Des variants pathogènes de PEX10 sont associés à des troubles de la biogenèse des péroxysomes du spectre de Zellweger, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier les mécanismes de dysfonctionnement des organites.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Peroxin 10 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PEX10 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PEX10, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PEX10 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Peroxin 10.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PEX10 pour l'étude de la signalisation de Peroxin 10, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PEX10 essentiels à la fonction de Peroxin 10
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PEX10 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Peroxin 10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Peroxin 10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PEX10. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Peroxin 10 plasmide HDR (h) et le Peroxin 10 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PEX10 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PEX10 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.