Pepsin C Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404137

Descripción general

PGC codifica la pepsina C, una endopeptidasa aspártica (gastricsina) que se secreta como zimógeno y se activa en condiciones ácidas para participar en la proteólisis gástrica. En el estómago, la pepsina C contribuye a la digestión luminal de proteínas y al procesamiento de péptidos, actuando dentro de redes de proteasas dependientes del ácido que complementan la actividad de la pepsina A. Los cambios en la expresión de PGC y en los patrones de secreción de pepsina C se han utilizado como indicadores de alteraciones en la diferenciación de la mucosa gástrica y en la homeostasis epitelial. La desregulación de los programas de proteasas gástricas se examina con frecuencia en el contexto de la remodelación inflamatoria y la transformación neoplásica del tracto gastrointestinal superior, lo que respalda estudios mecanísticos en modelos celulares gástricos y sistemas derivados de tejido.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Pepsin C (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PGC en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PGC junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PGC tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Pepsin C.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PGC para la investigación de la señalización de Pepsin C, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PGC críticos para la función de Pepsin C
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PGC para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Pepsin C CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Pepsin C CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PGC. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Pepsin C (h) y el plásmido HDR Pepsin C (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PGC para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PGC definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.