PEDF Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400849-ACT

SERPINF1 codifica o fator derivado do epitélio pigmentar (PEDF), uma glicoproteína secretada da família das serpinas que atua como um potente regulador da angiogênese, da inflamação e da homeostase tecidual. O PEDF modula a sobrevivência e a migração de células endoteliais e influencia a remodelação da matriz extracelular e as respostas ao estresse oxidativo, contribuindo para o equilíbrio vascular e neurotrófico em múltiplos tecidos. Alterações na expressão de SERPINF1/PEDF têm sido associadas à desregulação da remodelação vascular e de programas fibróticos, com evidências de pesquisa ligando-o a condições oculares neovasculares e a mudanças mais amplas no microambiente estromal. Além disso, a perda de função de SERPINF1 está implicada em fenótipos de fragilidade esquelética, destacando o papel do PEDF na biologia do tecido conjuntivo e da mineralização.

PEDF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SERPINF1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PEDF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SERPINF1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SERPINF1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PEDF. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SERPINF1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PEDF no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PEDF em células tumorais com expressão de SERPINF1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.