Plásmido Doble Nickase (h) PEBP2β: sc-401983-NIC

CBFB codifica la subunidad beta del factor de unión al núcleo (core-binding factor), PEBP2β, un socio que no se une al ADN y que forma heterodímeros con los factores de transcripción RUNX para estabilizar la unión al ADN y regular programas de transcripción necesarios para la hematopoyesis, la osteogénesis y la diferenciación de células inmunitarias. A través de los complejos RUNX/CBF, CBFB influye en la expresión génica específica de linaje, el control del ciclo celular y el patrón de desarrollo, vinculándolo a vías que coordinan proliferación y diferenciación. La alteración o el reordenamiento de CBFB modifica la fidelidad transcripcional y se asocia con la biología de las neoplasias hematológicas, lo que convierte a CBFB en un nodo clave para estudiar los bloqueos de diferenciación y la regulación transcripcional aberrante. Su papel como cofactor de RUNX también proporciona un marco para investigar dianas aguas abajo y mecanismos asociados a la cromatina que controlan el compromiso de linaje.

PEBP2β El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CBFB en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CBFB. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CBFB. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CBFB alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.