Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
PDI Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422099
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- PDI El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico PDI, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PDI Anticuerpo (C-2): sc-74551
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
PDI Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422099 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
P4hb codifica la isomerasa de disulfuro de proteínas (PDI), una oxidoreductasa abundante del retículo endoplásmico (RE) que cataliza la formación, reducción e isomerización de enlaces disulfuro para favorecer el plegamiento y la maduración de proteínas secretoras y de membrana. PDI actúa en redes de proteostasis del RE, asociándose con chaperonas y oxidoreductasas para regular el plegamiento oxidativo de proteínas y el control de calidad, y contribuye a la señalización de estrés del RE y a las vías de la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR). A través de su actividad de intercambio tiol-disulfuro y de sus interacciones con sustratos mal plegados, PDI influye en la homeostasis redox, el tráfico proteico y las decisiones de supervivencia celular bajo estrés proteotóxico. La actividad desregulada de P4hb/PDI se ha vinculado a estados patológicos caracterizados por estrés crónico del RE y un equilibrio redox alterado, lo que la convierte en un objetivo relevante para estudios mecanísticos en modelos de neurodegeneración, disfunción metabólica y biología del cáncer.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO PDI (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen P4hb en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del P4hb junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de P4hb tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PDI.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en P4hb para la investigación de la señalización de PDI, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de P4hb críticos para la función de PDI
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de P4hb para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido PDI CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PDI CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus P4hb. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PDI (m) y el plásmido HDR PDI (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología P4hb para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana P4hb definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.