PDGF Receptor beta/PDGFRB Double Nickaseプラスミド (m): sc-422171-NIC

マウスのPdgfrbは、血小板由来増殖因子受容体β（PDGFRB）をコードしている。PDGFRBは受容体型チロシンキナーゼであり、血管の成熟および組織リモデリングの過程で、ペリサイトや血管平滑筋細胞の増殖・遊走・生存を制御する。PDGFリガンドが結合すると、PDGFRBはPI3K–AKT、RAS–MAPK、PLCγといった標準的なシグナル伝達カスケードを活性化し、下流のアダプタータンパク質を介して細胞骨格ダイナミクスや細胞外マトリックスとの相互作用を協調的に調節する。発生期および成体の血管系において、PDGFRB依存的シグナルは血液脳関門の完全性、創傷修復、ならびに間質—免疫クロストークの維持を支える。PDGFRB活性の破綻（異常）は、マウスモデルにおける血管新生、線維化、炎症性リモデリング、腫瘍関連間質生物学の研究で、分子学的な指標（リードアウト）としてしばしば利用される。

PDGF Receptor beta/PDGFRB ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Pdgfrb 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Pdgfrb内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Pdgfrbの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Pdgfrbが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。