PDGF Receptor alpha/PDGFRA Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400107-ACT

PDGFRA codifica o receptor alfa do fator de crescimento derivado de plaquetas (platelet-derived growth factor receptor alpha), uma tirosina quinase de membrana que se liga a ligantes PDGF para iniciar a autofosforilação e a sinalização a jusante pelas vias PI3K–AKT, RAS–MAPK e PLCγ. Essa sinalização regula a proliferação, a sobrevivência e a migração celulares, bem como a remodelação da matriz extracelular, com papéis proeminentes na biologia mesenquimal e estromal durante o desenvolvimento e a homeostase tecidual. A atividade desregulada de PDGFRA está implicada em programas aberrantes de sinalização por fatores de crescimento observados em múltiplos contextos associados ao câncer e em microambientes fibroproliferativos e inflamatórios. Como um nó de quinase na superfície celular, PDGFRA é frequentemente estudado quanto aos mecanismos que controlam o tráfego do receptor, a cinética de sinalização dependente de ligante e a comunicação cruzada entre vias.

PDGF Receptor alpha/PDGFRA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PDGFRA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PDGF Receptor alpha/PDGFRA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PDGFRA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PDGFRA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PDGF Receptor alpha/PDGFRA. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PDGFRA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PDGF Receptor alpha/PDGFRA no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PDGF Receptor alpha/PDGFRA em células tumorais com expressão de PDGFRA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.