Plásmido CRISPR de Activación (h) PCYOX1: sc-407075-ACT

PCYOX1 (prenilcisteína oxidasa 1) codifica una oxidasa dependiente de flavina que cataliza la degradación oxidativa de las prenilcisteínas generadas durante el recambio de proteínas preniladas, contribuyendo a la eliminación de metabolitos de cisteína modificados con lípidos. Mediante este paso catabólico, PCYOX1 conecta la dinámica de la prenilación de proteínas con el equilibrio redox celular y la homeostasis metabólica, con efectos posteriores sobre la señalización del estrés oxidativo y las respuestas inflamatorias. Las alteraciones en la expresión y la actividad de PCYOX1 se han asociado con vías relevantes para rasgos cardiometabólicos, biología vascular y manejo de lípidos, lo que respalda su estudio en modelos de aterosclerosis y estados inflamatorios relacionados. En células humanas, la perturbación de PCYOX1 puede utilizarse para investigar cómo los subproductos de la prenilación influyen en la función mitocondrial, la producción de especies reactivas de oxígeno y los programas transcripcionales de adaptación al estrés.

PCYOX1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PCYOX1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PCYOX1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PCYOX1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PCYOX1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PCYOX1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PCYOX1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PCYOX1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PCYOX1 en células tumorales con expresión de PCYOX1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.