PCYOX1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407075-ACT

PCYOX1 (oxidase de prenilcisteína 1) codifica uma oxidase dependente de flavina que catalisa a degradação oxidativa de prenilcisteínas geradas durante o turnover de proteínas preniladas, contribuindo para a eliminação de metabólitos de cisteína modificados por lipídios. Por meio dessa etapa catabólica, a PCYOX1 conecta a dinâmica da prenilação proteica ao equilíbrio redox celular e à homeostase metabólica, com efeitos a jusante na sinalização de estresse oxidativo e em respostas inflamatórias. Alterações na expressão e na atividade de PCYOX1 têm sido associadas a vias relevantes para características cardiometabólicas, biologia vascular e processamento de lipídios, sustentando seu estudo em modelos de aterosclerose e estados inflamatórios relacionados. Em células humanas, a perturbação de PCYOX1 pode ser usada para investigar como subprodutos da prenilação moldam a função mitocondrial, a produção de espécies reativas de oxigênio e programas transcricionais adaptativos ao estresse.

PCYOX1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PCYOX1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PCYOX1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PCYOX1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PCYOX1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PCYOX1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PCYOX1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PCYOX1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PCYOX1 em células tumorais com expressão de PCYOX1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.