PC-PLD2CRISPR激活质粒(h): sc-402056-ACT

人类 PLD2 基因编码磷脂酶 D2（phospholipase D2），这是一种膜相关酶，可水解磷脂酰胆碱生成磷脂酸；磷脂酸是一种脂质第二信使，能够调控膜动力学与细胞信号传导。PC-PLD2 的活性支持受体驱动的信号转导、内吞与囊泡运输以及细胞骨架重塑，将来自生长因子与 GPCR 通路的输入与 PI3K–AKT、mTOR 等下游网络整合起来。通过调控细胞迁移、黏附及炎症介质的产生，PLD2 参与与致癌信号、免疫细胞功能和代谢应激反应相关的过程。PLD2 表达或活性改变与肿瘤生物学中增殖与运动能力失衡以及炎症性病理生理过程有关，因此是开展脂质信号机制研究的一个有价值节点。

PC-PLD2 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性PLD2的表达。

PC-PLD2 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的PLD2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于PLD2转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性PC-PLD2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的PLD2位点，并能够研究内源性位点上依赖于PC-PLD2的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在PLD2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟PC-PLD2通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。