Plasmide CRISPR/Cas9 KO PBR (m): sc-419383

Présentation

Le gène murin **Tspo** code le récepteur benzodiazépine périphérique (PBR), une protéine de 18 kDa principalement localisée à la membrane mitochondriale externe, qui se lie au cholestérol et aux porphyrines et contribue à l’homéostasie mitochondriale. Le PBR participe au transport du cholestérol et au métabolisme stéroïdogène, régule la perméabilité mitochondriale et la signalisation associée à l’apoptose, et influence l’équilibre des espèces réactives de l’oxygène ainsi que les réponses inflammatoires. L’expression de Tspo/PBR est enrichie dans la microglie activée et les cellules immunitaires périphériques, et il est largement utilisé comme marqueur de la neuroinflammation, avec une pertinence supplémentaire pour les dysfonctionnements mitochondriaux observés dans les troubles neurodégénératifs et les contextes de stress métabolique. Ces fonctions font de Tspo un nœud utile pour disséquer les réseaux de signalisation liés aux mitochondries qui couplent le stress cellulaire à l’activation immunitaire et au remodelage tissulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PBR (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tspo dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tspo, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tspo à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PBR.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tspo pour l'étude de la signalisation de PBR, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tspo essentiels à la fonction de PBR
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tspo pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PBR plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PBR plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tspo. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PBR plasmide HDR (m) et le PBR (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tspo pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tspo définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.