Plásmido Doble Nickase (m) PB1: sc-426270-NIC

El gen Pbrm1 de ratón codifica PB1 (también conocida como PBRM1/BAF180), una subunidad característica del complejo de remodelación de cromatina PBAF SWI/SNF, que reconoce histonas acetiladas mediante múltiples bromodominios y ayuda a posicionar los nucleosomas para regular la transcripción. PB1 influye en la comunicación entre potenciadores y promotores, en las respuestas al daño del ADN y en programas de diferenciación específicos de linaje al coordinar la accesibilidad de la cromatina con la unión de factores de transcripción. La pérdida o alteración de Pbrm1 perturba el control epigenético de redes del ciclo celular y de respuesta al estrés, y se estudia con frecuencia en el contexto de la biología de supresores tumorales, la estabilidad genómica y la señalización inflamatoria. En modelos de ratón, Pbrm1 se utiliza ampliamente para investigar cómo los remodeladores de cromatina moldean los microambientes inmunitarios, la adaptación metabólica y los fenotipos del desarrollo.

PB1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Pbrm1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Pbrm1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Pbrm1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Pbrm1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.