Plásmido CRISPR de Activación (h) Pax-7: sc-400662-ACT

PAX7 codifica el factor de transcripción con caja pareada Pax-7, un regulador clave de la especificación del linaje miogénico y del mantenimiento de las células madre del músculo esquelético. Pax-7 coordina programas transcripcionales que controlan la proliferación, la autorrenovación y la diferenciación, actuando en conjunto con factores reguladores miogénicos para gobernar la regeneración muscular y el patrón del desarrollo. Además de sus funciones en el sistema nervioso central y en linajes derivados de la cresta neural, la actividad desregulada de PAX7 se ha vinculado con alteraciones de la identidad celular y con estados transcripcionales oncogénicos, incluido el rabdomiosarcoma impulsado por fusiones. Como determinante de linaje, Pax-7 se utiliza ampliamente como marcador y como nodo funcional para estudiar decisiones de destino celular, regulación de la cromatina y redes génicas del desarrollo en células humanas.

Pax-7 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PAX7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Pax-7 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PAX7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PAX7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Pax-7. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PAX7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Pax-7 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Pax-7 en células tumorales con expresión de PAX7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.