Pax-7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400662-ACT

PAX7 codifica o fator de transcrição Pax-7, da família paired box, um regulador-chave da especificação da linhagem miogênica e da manutenção de células-tronco do músculo esquelético. O Pax-7 coordena programas transcricionais que controlam proliferação, autorrenovação e diferenciação, atuando em conjunto com fatores regulatórios miogênicos para governar a regeneração muscular e o padrão de desenvolvimento. Além de suas funções no sistema nervoso central e em linhagens derivadas da crista neural, a atividade desregulada de PAX7 tem sido associada à alteração da identidade celular e a estados transcricionais oncogênicos, incluindo o rabdomiossarcoma impulsionado por fusões. Como determinante de linhagem, o Pax-7 é amplamente utilizado como marcador e como nó funcional para estudar decisões de destino celular, regulação da cromatina e redes gênicas do desenvolvimento em células humanas.

Pax-7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PAX7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Pax-7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PAX7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PAX7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Pax-7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PAX7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Pax-7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Pax-7 em células tumorais com expressão de PAX7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.