Pax-6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422119-ACT

O Pax6 de camundongo codifica o fator de transcrição Pax-6, um regulador de ligação ao DNA do tipo paired box/homeobox que coordena programas de expressão gênica necessários para o desenvolvimento do olho, do prosencéfalo e do sistema endócrino pancreático. O Pax-6 integra-se a redes de sinalização do desenvolvimento, incluindo Wnt, Shh, BMP/TGF-β e Notch, para controlar a especificação de progenitores, o comprometimento de linhagens e a diferenciação neuronal. Alterações na dosagem ou na atividade regulatória de Pax6 perturbam o padrão de desenvolvimento e têm sido associadas, em sistemas modelo, a malformações oculares congênitas, defeitos do neurodesenvolvimento e disfunção endócrina. Como regulador mestre, o Pax-6 é frequentemente utilizado para estudar a lógica cis-regulatória, transições no estado da cromatina e circuitos transcricionais subjacentes às decisões de destino celular.

Pax-6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Pax6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Pax-6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Pax6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Pax6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Pax-6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Pax6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Pax-6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Pax-6 em células tumorais com expressão de Pax6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.