Plasmide Double Nickase (h2) Pax-2: sc-402171-NIC-2
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h2) Pax-2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Pax-2 Double Nickase (h2) et le plasmide Pax-2 Double Nickase (h22) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PAX2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Pax-2 Antibody (60-P): sc-130387
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h2) Pax-2 | sc-402171-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain PAX2 code le facteur de transcription à boîte appariée Pax-2, un régulateur se liant à l’ADN indispensable à la mise en place des patrons embryonnaires et à la spécification des lignages, en particulier lors du développement du rein, de l’appareil urogénital et du système nerveux central. Pax-2 contrôle des programmes transcriptionnels dépendants du contexte en reconnaissant des sites de liaison de type « paired-box » et en coordonnant son action avec la chromatine ainsi qu’avec des complexes co-régulateurs, afin d’influencer la différenciation épithéliale, la morphogenèse et la prolifération au cours de l’organogenèse. Une expression dérégulée de PAX2 ou des altérations génétiques de ce gène sont liées à des anomalies congénitales du rein et des voies urinaires et ont été associées à des états transcriptionnels oncogéniques dans plusieurs contextes tumoraux, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des réseaux de régulation génique du développement et des mécanismes pathologiques. Des réactifs d’édition génétique de PAX2 permettent des approches ciblées de type knockout, knock-in ou la perturbation d’éléments régulateurs afin d’explorer les voies dépendantes de Pax-2, de cartographier les cibles en aval et de modéliser, dans des cellules humaines, des phénotypes liés au développement et à la transformation.
Pax-2 Le plasmide double nickase (h2) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PAX2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PAX2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PAX2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PAX2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.