Plasmide CRISPR/Cas9 KO patched 2 (h): sc-404866

Présentation

PTCH2 code patched 2, un récepteur transmembranaire à douze passages qui constitue un régulateur négatif majeur de la signalisation Hedgehog en liant les ligands Hedgehog et en modulant l’activité de Smoothened. En contrôlant la transcription dépendante de GLI, PTCH2 contribue à la mise en place des patrons de développement, aux décisions de destinée cellulaire et à l’homéostasie tissulaire, et son activité recoupe des processus tels que la prolifération, la différenciation et la ciliogenèse. Une signalisation anormalement régulée de la voie Hedgehog et des altérations de la fonction de PTCH2 ont été associées à des contextes de signalisation oncogénique ainsi qu’à des phénotypes congénitaux ou développementaux, ce qui souligne sa pertinence pour des études mécanistiques centrées sur cette voie. PTCH2 est également étudié en lien avec le trafic des récepteurs et la régulation par rétrocontrôle, qui ajustent l’amplitude et la durée du signal.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO patched 2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PTCH2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PTCH2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PTCH2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine patched 2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PTCH2 pour l'étude de la signalisation de patched 2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PTCH2 essentiels à la fonction de patched 2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PTCH2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le patched 2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le patched 2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PTCH2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le patched 2 plasmide HDR (h) et le patched 2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PTCH2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PTCH2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.