patched 2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404866

Descripción general

PTCH2 codifica patched 2, un receptor transmembrana de doce pasos que actúa como un regulador negativo clave de la señalización Hedgehog al unirse a los ligandos Hedgehog y modular la actividad de Smoothened. Mediante el control de la transcripción dependiente de GLI, PTCH2 contribuye al patrón del desarrollo, a las decisiones de destino celular y a la homeostasis tisular, y su actividad se cruza con procesos como la proliferación, la diferenciación y la ciliogénesis. La señalización desregulada de la vía Hedgehog y la función alterada de PTCH2 se han asociado con contextos de señalización oncogénica y con fenotipos congénitos o del desarrollo, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos centrados en la vía. PTCH2 también se investiga en relación con el tráfico del receptor y la regulación por retroalimentación que ajustan la amplitud y la duración de la señal.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO patched 2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PTCH2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PTCH2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PTCH2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína patched 2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PTCH2 para la investigación de la señalización de patched 2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PTCH2 críticos para la función de patched 2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PTCH2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido patched 2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido patched 2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PTCH2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR patched 2 (h) y el plásmido HDR patched 2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PTCH2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PTCH2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.