Parkin Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400226-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- ParkinO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Parkin (h) e o Plasmídeo Double Nickase Parkin (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para PARK2. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Parkin Anticorpo (PRK8): sc-32282
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Parkin Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400226-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Parkin Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400226-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PARK2 codifica a Parkin, uma ligase E3 de ubiquitina da família RBR que coordena a renovação de proteínas dependente de ubiquitina e o controlo de qualidade mitocondrial. Em resposta à despolarização mitocondrial, a Parkin é recrutada a jusante de PINK1 para ubiquitinar substratos da membrana externa da mitocôndria, promovendo a mitofagia e a remodelação da dinâmica mitocondrial. Pelos seus papéis na proteostase, nas respostas ao stress oxidativo e na manutenção sináptica, a desregulação da atividade de Parkin está associada à vulnerabilidade neuronal e é frequentemente estudada no contexto da doença de Parkinson de início precoce e de mecanismos neurodegenerativos relacionados. A Parkin também interage com vias de sinalização inflamatória e de adaptação metabólica, o que a torna relevante para investigações de disfunção mitocondrial em diferentes tipos celulares.
Parkin O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus PARK2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de PARK2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função PARK2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com PARK2 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.