Plasmide CRISPR/Cas9 KO Paraplegin (h): sc-406299

Présentation

SPG7 code la paraplégine, une métalloprotéase ATP‑dépendante de la membrane interne mitochondriale appartenant au complexe protéase m‑AAA, qui assure le contrôle qualité des protéines, leur maturation protéolytique et le renouvellement de substrats mal conformés associés à la membrane ou à la matrice. La paraplégine contribue à la protéostasie mitochondriale, au maintien de la chaîne respiratoire et aux réponses homéostatiques au stress oxydatif et protéotoxique, via une surveillance coordonnée de la composition protéique de la membrane interne. L’altération de SPG7 perturbe la fonction mitochondriale et est associée à des phénotypes neurodégénératifs, notamment la paraplégie spastique héréditaire, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier la vulnérabilité axonale et le maintien neuronal dépendant de l’énergie. Les modèles centrés sur SPG7 éclairent également les voies impliquées dans la dynamique mitochondriale, les réponses aux protéines mal repliées et la signalisation adaptative au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Paraplegin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SPG7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SPG7, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SPG7 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Paraplegin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SPG7 pour l'étude de la signalisation de Paraplegin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SPG7 essentiels à la fonction de Paraplegin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SPG7 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Paraplegin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Paraplegin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SPG7. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Paraplegin plasmide HDR (h) et le Paraplegin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SPG7 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SPG7 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.