Plasmide Double Nickase (h) PAR-4: sc-401719-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) PAR-4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PAR-4 Double Nickase (h) et le plasmide PAR-4 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant F2RL3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PAR-4 Antibody (5F4): sc-293206
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) PAR-4 | sc-401719-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) PAR-4 | sc-401719-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
F2RL3 code le récepteur activé par les protéases 4 (PAR-4), un RCPG sensible à la thrombine, activé par clivage protéolytique qui met à nu un ligand attaché, déclenchant une signalisation via Gq/11 et G12/13. L’activation de PAR-4 favorise une mobilisation du calcium dépendante de la phospholipase C, l’activation de la PKC et un remodelage du cytosquelette médié par RhoA, en intégration avec les voies MAPK/ERK pour réguler l’activation plaquettaire, la sécrétion des granules et la stabilisation du thrombus. Au-delà de l’hémostase, l’activité de F2RL3/PAR-4 contribue à la signalisation inflammatoire dans des contextes vasculaires et immunitaires et a été étudiée dans la biologie des maladies cardiométaboliques et vasculaires, notamment dans des processus liés à l’athérosclérose. Son expression et la dynamique de sa signalisation constituent également un point d’entrée mécanistique pour étudier le dialogue protéases–RCPG et l’inflammation liée à la coagulation dans des modèles cellulaires humains pertinents.
PAR-4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus F2RL3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de F2RL3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de F2RL3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de F2RL3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.