PAR-3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420266

Descripción general

El gen F2rl2 del ratón codifica el receptor activado por proteasas 3 (PAR-3), un miembro de la familia de los GPCR que se activa en el contexto de la señalización por proteasas extracelulares y de señales asociadas a la coagulación. PAR-3 participa en redes de receptores activados por proteasas que pueden activar la señalización mediada por proteínas G heterotriméricas y coordinar vías aguas abajo que influyen en los flujos de calcio, las respuestas de MAPK y la remodelación del citoesqueleto en tipos celulares sensibles. En sistemas murinos, F2rl2 se estudia por sus funciones en la biología vascular e inflamatoria, la señalización asociada a plaquetas y la comunicación estroma-inmune dentro de los microambientes tisulares. La señalización desregulada de receptores de proteasas es relevante en modelos de trombosis, inflamación y biología del cáncer, donde la alteración de la expresión del receptor o del tono de señalización puede remodelar la migración celular y los procesos relacionados con la barrera.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PAR-3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen F2rl2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del F2rl2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de F2rl2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PAR-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en F2rl2 para la investigación de la señalización de PAR-3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de F2rl2 críticos para la función de PAR-3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de F2rl2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PAR-3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PAR-3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus F2rl2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PAR-3 (m) y el plásmido HDR PAR-3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología F2rl2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana F2rl2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.