Plasmide CRISPR/Cas9 KO PAP-α (h): sc-403906

Présentation

PAPOLA code la poly(A) polymérase alpha (PAP-α), un composant catalytique central de la machinerie de maturation de l’extrémité 3′ des ARNm, qui ajoute des queues poly(A) aux pré-ARNm après clivage au niveau des sites de polyadénylation. En contrôlant la longueur de la queue poly(A) et en s’associant aux facteurs de spécificité du clivage et de la polyadénylation, PAP-α influence la stabilité des ARNm, leur export nucléaire et l’efficacité de traduction, façonnant ainsi les programmes globaux d’expression génique. La polyadénylation alternative dépendante de PAPOLA contribue à la diversité des isoformes de transcrits et peut remodeler la régulation post-transcriptionnelle lors de la prolifération et de la différenciation. Des altérations de la maturation de l’extrémité 3′ et des profils de polyadénylation sont impliquées dans la biologie du cancer et dans d’autres troubles du contrôle de l’expression génique, faisant de PAP-α un point d’entrée utile pour des études mécanistiques du métabolisme de l’ARN.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PAP-α (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PAPOLA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PAPOLA, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PAPOLA à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PAP-α.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PAPOLA pour l'étude de la signalisation de PAP-α, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PAPOLA essentiels à la fonction de PAP-α
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PAPOLA pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PAP-α plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PAP-α plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PAPOLA. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PAP-α plasmide HDR (h) et le PAP-α (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PAPOLA pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PAPOLA définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.