Pannexin-1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-424967-LAC

Panx1 codifica a pannexina-1, um canal da membrana plasmática amplamente expresso que permite a liberação regulada de ATP e de outras pequenas moléculas, dando suporte à sinalização parácrina. A atividade da pannexina-1 integra-se às vias dos receptores purinérgicos (P2X/P2Y) para moldar o fluxo de cálcio, a sinalização associada ao inflamassoma e respostas celulares coordenadas durante estresse, estimulação mecânica e morte celular. Em sistemas murinos, Panx1 tem sido implicado na modulação do recrutamento de células imunes e de redes de citocinas, bem como na regulação da comunicação neuronal e glial por meio de sinalização por nucleotídeos extracelulares. A disfunção dos canais de PANX1 e a dinâmica alterada de liberação de ATP são frequentemente estudadas em contextos como neuroinflamação, dor neuropática, respostas a lesão isquêmica e interações tumor–sistema imune, como alvos de investigação mecanística.

As Partículas de Ativação Lentivirais Pannexin-1 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Panx1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Pannexin-1 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Panx1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Pannexin-1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Panx1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.