Partículas Lentivirales de Activación (m) Pannexin-1: sc-424967-LAC

Panx1 codifica la pannexina-1, un canal de la membrana plasmática ampliamente expresado que permite la liberación regulada de ATP y otras moléculas pequeñas para apoyar la señalización paracrina. La actividad de la pannexina-1 se integra con las vías de los receptores purinérgicos (P2X/P2Y) para modular el flujo de calcio, la señalización asociada al inflamasoma y las respuestas celulares coordinadas durante el estrés, la estimulación mecánica y la muerte celular. En sistemas murinos, se ha implicado a Panx1 en la modulación del reclutamiento de células inmunitarias y de las redes de citocinas, así como en la regulación de la comunicación neuronal y glial mediante señalización por nucleótidos extracelulares. La función desregulada del canal PANX1 y la dinámica alterada de liberación de ATP se estudian con frecuencia en contextos que incluyen la neuroinflamación, el dolor neuropático, las respuestas a lesión isquémica y las interacciones tumor–sistema inmunitario, como dianas de investigación mecanística.

Las partículas de activación lentiviral Pannexin-1 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Panx1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Pannexin-1 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Panx1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Pannexin-1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Panx1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.