Pancreatic Polypeptide CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422391

Übersicht

Das Mausgen **Ppy** kodiert das pankreatische Polypeptid, ein Peptidhormon, das von pankreatischen PP‑ (γ‑)Zellen produziert wird und die gastrointestinale Motilität, die Kontraktion der Gallenblase sowie die exokrine Pankreassekretion moduliert und dabei Appetit und Energiehomöostase beeinflusst. Über die Signalübertragung über Mitglieder der Neuropeptid‑Y‑Rezeptorfamilie integriert das pankreatische Polypeptid autonome Inputs mit der Nährstoffwahrnehmung, um Verdauungs‑ und Stoffwechselreaktionen zu koordinieren. Eine veränderte PP‑Zell‑Funktion und veränderte Dynamiken des pankreatischen Polypeptids wurden in Modellen metabolischen Stresses mit einer Fehlregulation des Glukosestoffwechsels, adipositasassoziierten Phänotypen und einem Umbau des endokrinen Pankreas in Verbindung gebracht. **Ppy** wird daher häufig als Marker der PP‑Zell‑Identität verwendet und dient als Ansatzpunkt zur Untersuchung der Heterogenität von Inselzellen sowie der Darm‑Pankreas‑Kommunikation.

Das Pancreatic Polypeptide CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ppy-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ppy-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ppy nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Pancreatic Polypeptide-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ppy-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Pancreatic Polypeptide-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ppy-Exone abzielen, die für die Pancreatic Polypeptide-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ppy-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Pancreatic Polypeptide CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Pancreatic Polypeptide CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ppy-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Pancreatic Polypeptide HDR-Plasmid (m) und Pancreatic Polypeptide HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ppy-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ppy-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.