Pancreatic Lipase Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402264-ACT

PNLIP codifica a lipase pancreática, uma hidrolase digestiva secretada que catalisa a hidrólise de triacilgliceróis da dieta em monoacilgliceróis e ácidos gordos livres no lúmen intestinal. Atuando na interface lípido–água em conjunto com a colipase e os sais biliares, a PNLIP contribui para a absorção intestinal de lípidos e para o processamento metabólico subsequente de ácidos gordos e nutrientes lipossolúveis. Alterações na expressão ou na atividade da PNLIP têm sido associadas a disfunção pancreática exócrina e a perturbações da digestão de gorduras, sendo frequentemente utilizada como marcador funcional em estudos de biologia dos ácinos pancreáticos. Como a digestão lipídica influencia o equilíbrio energético sistémico e a sinalização nutricional, a PNLIP também é relevante para a investigação de fenótipos metabólicos associados à função pancreática.

Pancreatic Lipase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PNLIP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Pancreatic Lipase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PNLIP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PNLIP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Pancreatic Lipase. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PNLIP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Pancreatic Lipase no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Pancreatic Lipase em células tumorais com expressão de PNLIP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.