Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PAK4 Double Nickase Plasmid (h): sc-401895-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PAK4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PAK4 Double-Nickase-Plasmid (h) und PAK4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PAK4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PAK4: sc-390507
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PAK4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401895-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PAK4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401895-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PAK4 kodiert die p21-aktivierte Kinase 4, eine Serin/Threonin-Kinase, die stromabwärts von Rho-Familien-GTPasen wie Cdc42 wirkt und den Umbau des Zytoskeletts, die Zellpolarität sowie die gerichtete Migration koordiniert. Die PAK4-Signalübertragung ist mit Signalwegen verknüpft, die den Umsatz fokaler Adhäsionen, die Aktindynamik und pro-survivale Signale steuern, und beeinflusst damit Prozesse wie adhäsionsabhängiges Wachstum und invasives Verhalten. Durch die Phosphorylierung zytoskelettaler und regulatorischer Substrate trägt PAK4 zur Regulation von Apoptoseresistenz und Zellzyklusprogression bei. Eine dysregulierte Expression oder Aktivität von PAK4 wurde mit onkogenen Signalkontexten und metastatischen Phänotypen in Verbindung gebracht, weshalb PAK4 häufig Ziel in Studien zur Tumorzellmotilität und zu Überlebensmechanismen ist.
PAK4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PAK4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PAK4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PAK4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PAK4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.