PADI4 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-422177-ACT

Das Mausgen *Padi4* kodiert die Peptidylarginin-Deiminase 4 (PADI4), ein Ca2+-abhängiges Enzym, das Argininreste in Proteinen citrulliniert, um Proteinladung, Chromatinorganisation und Transkriptionsprogramme zu modulieren. PADI4 ist in myeloischen Zelllinien angereichert und steht im Zusammenhang mit Histon-Citrullinierung während der Bildung neutrophiler extrazellulärer Fallen (NETs), wodurch Signalwege der angeborenen Immunität und Entzündungsreaktionen beeinflusst werden. Über die Regulation epigenetischer Zustände und posttranslationale Modifikationen nukleärer und zytoskelettaler Substrate wirkt PADI4 auf Signalwege ein, die Zell­differenzierung und Stressantworten steuern. Eine dysregulierte Citrullinierung ist mit Autoimmunität und entzündlicher Pathologie assoziiert, wodurch *Padi4* ein nützliches Ziel für die Untersuchung immunvermittelter Krankheitsmechanismen und von Netzwerken der Proteinmodifikation ist.

PADI4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Padi4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PADI4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Padi4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Padi4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PADI4-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Padi4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PADI4-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PADI4-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Padi4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.