Plasmide CRISPR/Cas9 KO PABPC2 (m): sc-422101

Présentation

Pabpc2 code pour la protéine cytoplasmique de liaison à la poly(A) 2 (PABPC2), un facteur de liaison à l’ARN qui s’associe aux queues poly(A) afin de coordonner la stabilité des ARNm, l’efficacité de traduction et leur renouvellement, via des interactions avec la machinerie d’initiation de la traduction et de dégradation des ARNm. Dans le cadre de la régulation post‑transcriptionnelle de l’expression génique, PABPC2 contribue au contrôle dynamique des programmes d’expression des gènes lors des réponses au stress cellulaire, de la différenciation et des processus de développement chez la souris. Des altérations de la régulation de la longueur des queues poly(A) et du remodelage des mRNP cytoplasmiques sont largement associées à une protéostasie dérégulée et à un métabolisme de l’ARN aberrant, caractéristiques communes dans des modèles de neurodégénérescence, en biologie du cancer et dans la signalisation immunitaire. Pabpc2 constitue donc un nœud utile pour explorer les voies qui couplent les décisions de devenir des ARNm au phénotype cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PABPC2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Pabpc2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Pabpc2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Pabpc2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PABPC2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Pabpc2 pour l'étude de la signalisation de PABPC2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Pabpc2 essentiels à la fonction de PABPC2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Pabpc2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PABPC2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PABPC2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Pabpc2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PABPC2 plasmide HDR (m) et le PABPC2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Pabpc2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Pabpc2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.