Plasmide CRISPR/Cas9 KO PABP (m): sc-422100

Présentation

Le gène murin *Pabpc1* code la protéine de liaison à la poly(A) (PABP), un régulateur central du devenir des ARNm cytoplasmiques qui se fixe aux queues poly(A) et coordonne l’initiation de la traduction, la stabilisation des ARNm et leur dégradation dépendante de la déadénylation. Par ses interactions avec eIF4G et d’autres protéines se liant à l’ARN, PABP contribue à coupler la longueur de la queue poly(A) au recrutement des ribosomes et favorise une synthèse protéique efficace lors de la croissance, de la différenciation et des réponses au stress. PABP participe aussi à des programmes de contrôle post-transcriptionnel impliqués dans la progression du cycle cellulaire, l’apoptose et les réponses antivirales innées, faisant de *Pabpc1* un nœud pertinent dans les études de la dérégulation de l’expression génique. La perturbation des réseaux de régulation des ARNm dépendants de PABP est fréquemment étudiée dans le contexte de programmes de traduction oncogéniques et de phénotypes neurodéveloppementaux ou neurodégénératifs liés à une altération du métabolisme de l’ARN.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PABP (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Pabpc1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Pabpc1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Pabpc1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PABP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Pabpc1 pour l'étude de la signalisation de PABP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Pabpc1 essentiels à la fonction de PABP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Pabpc1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PABP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PABP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Pabpc1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PABP plasmide HDR (m) et le PABP (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Pabpc1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Pabpc1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.