Plasmide CRISPR d'Activation (h) PABP: sc-400688-ACT

Le gène humain **PABPC1** code la protéine de liaison à la poly(A) (**PABP**), un régulateur central du métabolisme des ARNm cytoplasmiques qui se fixe aux queues poly(A) 3′ afin de favoriser l’initiation de la traduction et de stabiliser les transcrits. Grâce à ses interactions avec des facteurs d’initiation de la traduction et des composants de la machinerie de dégradation des ARNm, PABP coordonne la circularisation des ARNm, l’efficacité de la traduction et le renouvellement dépendant de la désadénylation. PABPC1 contribue également à la dynamique des granules de stress et des corps P, reliant le contrôle traductionnel aux réponses cellulaires au stress. Des altérations de l’activité de PABP et de l’expression de PABPC1 ont été associées à des programmes d’expression génique dérégulés observés dans le cancer et lors des interactions virus–hôte, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la signalisation oncogénique et de la modulation de l’immunité innée.

PABP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PABPC1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PABP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PABPC1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PABPC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PABP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PABPC1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PABP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PABP dans les cellules tumorales présentant une expression de PABPC1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.