Plasmide CRISPR d'Activation (h) PA28γ: sc-403397-ACT

PSME3 code la sous-unité activatrice du protéasome humain PA28γ, un régulateur nucléaire de la fonction du protéasome 20S qui module le renouvellement des protéines indépendant de l’ATP et de l’ubiquitine. PA28γ contribue au contrôle de la protéostasie, influe sur la progression du cycle cellulaire et les réponses au stress, et affecte la dégradation de certaines protéines régulatrices qui façonnent les programmes transcriptionnels. Par son rôle dans le traitement médié par le protéasome, PA28γ s’inscrit au croisement de voies impliquées dans la réponse aux dommages de l’ADN, la régulation associée à la chromatine et la signalisation inflammatoire. Une expression ou une activité altérée de PSME3 a été associée dans la littérature à une prolifération dérégulée et à des phénotypes oncogéniques, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique en biologie du cancer et dans les études des voies du protéasome.

PA28γ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PSME3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PA28γ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PSME3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PSME3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PA28γ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PSME3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PA28γ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PA28γ dans les cellules tumorales présentant une expression de PSME3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.