Plasmide CRISPR d'Activation (h) p68 RNA Helicase: sc-402401-ACT

DDX5 code l’hélicase ARN p68, une hélicase ARN de type DEAD-box, ATP-dépendante, qui remodèle les complexes ARN–protéines afin de réguler l’épissage du pré-ARNm, la biogenèse des ribosomes, l’export des ARN et la maturation des microARN. p68 agit aussi comme corégulateur transcriptionnel en interagissant avec des facteurs tels que p53, la β-caténine et ERα, reliant le métabolisme des ARN au contrôle du cycle cellulaire et à des programmes d’expression génique sensibles au stress. Par ces activités, DDX5 participe à des voies qui coordonnent le traitement des ARN avec la dynamique de la chromatine et de la transcription, influençant la prolifération, la différenciation et les réponses aux dommages de l’ADN. Une expression ou une activité dérégulée de DDX5 a été associée à une altération des signalisations oncogéniques et à des signatures aberrantes de traitement des ARN observées dans de multiples contextes tumoraux, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique dans des études de régulation génique pertinentes pour la maladie.

p68 RNA Helicase Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DDX5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

p68 RNA Helicase Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DDX5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DDX5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de p68 RNA Helicase. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DDX5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de p68 RNA Helicase au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie p68 RNA Helicase dans les cellules tumorales présentant une expression de DDX5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.