p54/nrb Lentiviral Activation Particles (m): sc-424729-LAC

Das Mausgen **Nono** kodiert p54/nrb (NONO), ein multifunktionales nukleäres RNA- und DNA-bindendes Protein der DBHS-Familie, das mit SFPQ/PSPC1 Heterodimere bildet, um Paraspeckles zu organisieren und Transkription, prä-mRNA-Spleißen sowie RNA-Retention zu koordinieren. p54/nrb ist an der DNA-Schadensantwort und -reparatur beteiligt, einschließlich Funktionen beim nicht-homologen End-Joining, und hilft, signalabhängige Transkription über Interaktionen mit RNA-Polymerase-II-assoziierten Komplexen an die RNA-Prozessierung zu koppeln. Über die Regulation von Genexpressionsprogrammen, die Zellzyklusprogression, Differenzierung und Stressantworten steuern, wurde eine veränderte NONO-Aktivität mit Genominstabilität und aberranten Transkriptionsnetzwerken in Verbindung gebracht, die für Krebs und neuroentwicklungsbezogene Phänotypen relevant sind. Als Gerüst für Ribonukleoprotein-Assemblierungen beeinflusst p54/nrb zudem die Dynamik nukleärer Körper und die Regulation durch lange nichtkodierende RNAs, was es zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien der Kernorganisation macht.

p54/nrb Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Nono-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

p54/nrb Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Nono-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen p54/nrb-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Nono-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.