Plasmide CRISPR d'Activation (h) p53: sc-416469-ACT

TP53 code pour le suppresseur de tumeur humain p53, un facteur de transcription spécifique de séquence qui intègre la détection des dommages à l’ADN, le stress oncogénique et les points de contrôle du cycle cellulaire afin de maintenir la stabilité génomique. p53 régule des programmes contrôlant l’arrêt en G1/S et en G2/M, l’apoptose, la sénescence et la réparation de l’ADN via des voies canoniques impliquant la signalisation ATM/ATR et des cibles transcriptionnelles telles que CDKN1A (p21), BAX et MDM2. L’altération de la fonction de TP53 est fréquente dans le cancer et s’associe à des réponses au stress modifiées, à l’instabilité chromosomique et à une reprogrammation transcriptionnelle de grande ampleur. En tant que nœud central de la biologie du stress cellulaire, p53 est largement étudiée dans les mécanismes de transformation, de résistance au stress génotoxique et d’interactions entre voies de signalisation, notamment avec PI3K–AKT et MAPK.

p53 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TP53 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

p53 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TP53 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TP53, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de p53. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TP53 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de p53 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie p53 dans les cellules tumorales présentant une expression de TP53 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.