P4HA1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407173

Übersicht

P4HA1 kodiert die katalytische Alpha-Untereinheit der Prolyl-4-Hydroxylase, eines zentralen, im ER lokalisierten Enzyms, das Prolinreste in Prokollagen hydroxyliert und so die Stabilität der Tripelhelix sowie die Reifung der extrazellulären Matrix unterstützt. Durch die Regulation von Kollagenbiosynthese und -ablagerung beeinflusst P4HA1 den Matrixumbau, die Zell‑Matrix‑Adhäsion und die Gewebesteifigkeit – Prozesse, die mit hypoxieabhängigen Programmen und metabolischer Anpassung verknüpft sind. Eine veränderte P4HA1-Aktivität wurde mit fibrotischen Phänotypen und dem Remodeling der Tumormikroumgebung in Verbindung gebracht, wobei die Organisation der extrazellulären Matrix Invasion und stromale Signalgebung beeinflussen kann. Daher wird P4HA1 häufig in Signalwegen untersucht, die mit Kollagenfibrillogenese, ER‑Proteinverarbeitung und matrixgetriebener Regulation des Zellverhaltens zusammenhängen.

Das P4HA1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des P4HA1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des P4HA1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von P4HA1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die P4HA1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von P4HA1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der P4HA1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf P4HA1-Exone abzielen, die für die P4HA1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere P4HA1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom P4HA1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom P4HA1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des P4HA1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das P4HA1 HDR-Plasmid (h) und P4HA1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von P4HA1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten P4HA1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.