p47phox CRISPR Activationプラスミド (h): sc-417916-ACT

NCF1はp47phoxをコードしており、p47phoxは食細胞NADPHオキシダーゼ（NOX2）複合体の細胞質側に存在するオーガナイザー（構成）サブユニットで、刺激依存的な複合体の組み立てとスーパーオキシド産生の活性化に必須である。リン酸化を受けると、p47phoxは膜へ移行し、p67phox、p40phox、および膜結合型シトクロムb558（gp91phox/NOX2とp22phox）間の相互作用を調整することで、自然免疫応答における活性酸素種（ROS）産生を可能にする。この酸化バーストは、抗菌防御、レドックスシグナル伝達、炎症経路の調節を支え、NCF1活性を好中球やマクロファージの機能と結び付けている。NCF1/p47phoxの機能異常は、慢性肉芽腫症などの免疫不全表現型と関連し、炎症制御の破綻や自己免疫との関係でも研究されている。

p47phox CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NCF1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

p47phox CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NCF1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNCF1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性p47phoxの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNCF1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるp47phox依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNCF1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるp47phox経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。