Plasmide CRISPR d'Activation (h) p38 beta MAPK11: sc-400173-ACT

MAPK11 code pour p38β, une kinase activée par le stress de type MAPK (mitogen-activated protein kinase) de la famille p38, qui intègre des signaux extracellulaires tels que les cytokines inflammatoires, le stress oxydatif et l’exposition aux UV en sorties de signalisation dépendantes de la phosphorylation. p38β module des programmes transcriptionnels et une régulation post‑transcriptionnelle contrôlant la production de cytokines, les points de contrôle du cycle cellulaire, l’apoptose et la différenciation, via des substrats en aval incluant des kinases activées par les MAPK et des facteurs de transcription. L’activité de MAPK11 contribue à la signalisation de l’immunité innée et à des voies plus larges de réponse au stress, qui croisent l’inflammation régulée par NF‑κB et les interactions au sein du réseau MAPK. Une signalisation p38 dérégulée a été associée à des processus inflammatoires et neurodégénératifs, ainsi qu’à la biologie tumorale de manière dépendante du contexte, ce qui étaye des études mécanistiques sur le remodelage des voies et l’adaptation au stress.

p38 beta MAPK11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAPK11 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

p38 beta MAPK11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAPK11 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAPK11, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de p38 beta MAPK11. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAPK11 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de p38 beta MAPK11 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie p38 beta MAPK11 dans les cellules tumorales présentant une expression de MAPK11 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.