Plásmido Doble Nickase (h) P2Y7: sc-403664-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)P2Y7 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa P2Y7 (h) y el plásmido de doble nickasa P2Y7 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a LTB4R. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) P2Y7 | sc-403664-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) P2Y7 | sc-403664-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LTB4R codifica el receptor 1 de leucotrieno B4 (BLT1), un receptor acoplado a proteína G que transduce las señales del leucotrieno B4 para activar el flujo de PLCβ/Ca2+, las cascadas de MAPK y programas quimiotácticos dependientes de PI3K en células mieloides y otras células inmunitarias. La señalización de BLT1 coordina la adhesión, la migración y la desgranulación de los leucocitos, vinculando la detección de mediadores lipídicos con la regulación de las redes inflamatorias. La actividad desregulada de LTB4R se ha asociado con fenotipos inflamatorios crónicos y daño tisular mediado por el sistema inmune en múltiples contextos de enfermedad, lo que respalda su uso como diana para estudios mecanísticos de las vías de los leucotrienos. En investigación biomédica, la perturbación de LTB4R permite estudiar el tráfico celular impulsado por GPCR, la liberación de citocinas y la interacción con el metabolismo de los eicosanoides y la señalización de la inmunidad innata.
P2Y7 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LTB4R en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LTB4R. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LTB4R. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LTB4R alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.