P2Y5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405189

Descripción general

LPAR6 (también conocido como P2Y5) codifica un receptor acoplado a proteína G que responde al ácido lisofosfatídico para regular la señalización intracelular a través de proteínas G heterotriméricas. La actividad de P2Y5 influye en vías asociadas a Rho/ROCK y MAPK, coordinando la remodelación del citoesqueleto, la adhesión célula–célula y la motilidad de manera dependiente del contexto. Este receptor está implicado de forma destacada en la biología de la piel y del folículo piloso, donde la alteración de la señalización de LPAR6 se asocia con trastornos congénitos del crecimiento del cabello y con fenotipos más amplios relacionados con la homeostasis epitelial. Además, la señalización lipídica mediada por LPAR6 se cruza con procesos inflamatorios y relacionados con la función de barrera, lo que lo hace relevante para estudios mecanísticos en queratinocitos y otros modelos epiteliales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO P2Y5 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen LPAR6 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del LPAR6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de LPAR6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína P2Y5.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en LPAR6 para la investigación de la señalización de P2Y5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de LPAR6 críticos para la función de P2Y5
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de LPAR6 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido P2Y5 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido P2Y5 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus LPAR6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR P2Y5 (h) y el plásmido HDR P2Y5 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología LPAR6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana LPAR6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.