Plásmido Doble Nickase (m) P2Y4: sc-425395-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)P2Y4 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa P2Y4 (m) y el plásmido de doble nickasa P2Y4 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a P2ry4. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) P2Y4 | sc-425395-NIC | 20 µg | $410.00 |
P2ry4 codifica el receptor murino P2Y4, un receptor purinérgico acoplado a proteína G activado por nucleótidos extracelulares, que se acopla predominantemente a Gq/11 para estimular la señalización de la fosfolipasa C. La movilización de calcio aguas abajo y las vías dependientes de PKC vinculan a P2Y4 con la regulación del transporte iónico epitelial, la secreción mucosa y la contractilidad del músculo liso, además de funciones adicionales en la señalización de células inmunitarias y la homeostasis tisular. La señalización purinérgica mediada por GPCR se entrecruza con las cascadas inflamatorias, la función de barrera y las respuestas al estrés metabólico, lo que convierte a P2ry4 en un objetivo relevante para estudiar la comunicación impulsada por nucleótidos en la biología de las vías respiratorias, el tracto gastrointestinal y el sistema vascular. La actividad desregulada de los receptores P2Y se ha asociado con fenotipos inflamatorios y fibróticos en múltiples sistemas orgánicos, lo que respalda la investigación mecanística de P2ry4 en modelos relevantes para la enfermedad.
P2Y4 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus P2ry4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de P2ry4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de P2ry4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con P2ry4 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.