Plasmide CRISPR/Cas9 KO P2Y12 (h): sc-417999

Présentation

P2RY12 code le récepteur purinergique P2Y12, un RCPG couplé à Gi qui détecte l’ADP extracellulaire afin d’inhiber la signalisation de l’AMPc et d’orchestrer l’activation plaquettaire, l’agrégation et la stabilisation du thrombus via les voies en aval PI3K/AKT et la signalisation des intégrines. Au-delà de l’hémostase, P2Y12 est un marqueur caractéristique de la microglie homéostatique et module la chimiotaxie, la motilité des prolongements et la surveillance neuro-immunitaire en réponse aux nucléotides. Une activité ou une expression altérée de P2RY12 a été associée à une réactivité plaquettaire anormale ainsi qu’à des changements d’état microglial observés dans des contextes neuro-inflammatoires et neurodégénératifs. Ces caractéristiques font de P2RY12 une cible utile pour disséquer la signalisation induite par les nucléotides, la communication cellule–cellule et le dialogue croisé immuno-vasculaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO P2Y12 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène P2RY12 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du P2RY12, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert P2RY12 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine P2Y12.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en P2RY12 pour l'étude de la signalisation de P2Y12, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de P2RY12 essentiels à la fonction de P2Y12
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de P2RY12 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le P2Y12 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le P2Y12 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus P2RY12. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le P2Y12 plasmide HDR (h) et le P2Y12 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie P2RY12 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles P2RY12 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.