Plasmide CRISPR/Cas9 KO P2Y11 (h): sc-405745

Présentation

P2RY11 code pour le récepteur humain P2Y11, un récepteur couplé aux protéines G sensible à l’ATP/UTP, qui se distingue par sa capacité à activer à la fois les voies de signalisation Gq et Gs. En réponse à une stimulation par des nucléotides extracellulaires, P2Y11 favorise l’activation de la phospholipase C avec mobilisation du Ca²⁺ intracellulaire et augmente l’AMPc, intégrant les signaux purinergiques aux voies MAPK/ERK et à d’autres cascades de seconds messagers qui façonnent l’activation des cellules immunitaires et les programmes de cytokines. P2Y11 est exprimé dans plusieurs populations de leucocytes et est impliqué dans la régulation des réponses des cellules dendritiques, des monocytes et des lymphocytes T au sein de microenvironnements inflammatoires. Une signalisation purinergique dérégulée impliquant P2Y11 a été associée à des phénotypes inflammatoires et auto-immuns, ce qui justifie son étude dans des modèles d’immunométabolisme, de neuroinflammation et d’interactions tumeur–système immunitaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO P2Y11 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène P2RY11 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du P2RY11, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert P2RY11 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine P2Y11.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en P2RY11 pour l'étude de la signalisation de P2Y11, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de P2RY11 essentiels à la fonction de P2Y11
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de P2RY11 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le P2Y11 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le P2Y11 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus P2RY11. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le P2Y11 plasmide HDR (h) et le P2Y11 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie P2RY11 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles P2RY11 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.