Plasmide CRISPR d'Activation (h) P23: sc-402670-ACT

Le gène humain **PTGES3** code p23, une co‑chaperonne conservée de **HSP90** qui stabilise les complexes de protéines clientes et module le cycle d’ATPase afin de soutenir la maturation des protéines et la transduction du signal. p23 est surtout connue pour réguler l’assemblage des récepteurs aux hormones stéroïdiennes et la signalisation nucléaire, et elle participe également à des réseaux plus larges de protéostasie qui influencent les réponses au stress cellulaire et le contrôle transcriptionnel. Par son intégration aux voies dépendantes des chaperonnes, **PTGES3** peut affecter la prolifération cellulaire, la différenciation et les réponses adaptatives au stress protéotoxique. Un déséquilibre chaperonne/co‑chaperonne et une signalisation des récepteurs dérégulée ont été associés à des phénotypes pertinents pour les maladies, notamment dans des contextes de biologie du cancer et de signalisation inflammatoire, faisant de **PTGES3** un nœud utile pour des études mécanistiques.

P23 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PTGES3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

P23 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PTGES3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PTGES3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de P23. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PTGES3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de P23 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie P23 dans les cellules tumorales présentant une expression de PTGES3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.