p19 INK4D/CDKN2D CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401761

Übersicht

CDKN2D kodiert p19^INK4D, ein Mitglied der INK4-Familie cyclinabhängiger Kinaseinhibitoren, das die Aktivität von CDK4/6 selektiv hemmt, um RB1 in einem hypophosphorylierten Zustand zu halten und das Fortschreiten des Zellzyklus vom G1- in das S‑Stadium zu begrenzen. Durch die Modulation der Cyclin‑D–CDK‑Signalgebung trägt p19^INK4D in verschiedenen Geweben zur Checkpoint-Kontrolle, zum zeitlichen Ablauf der Proliferation und zu Programmen der zellulären Differenzierung bei. Störungen dieses Signalwegs sind häufig mit einem fehlregulierten Eintritt in den Zellzyklus und Defekten der Genomstabilität verbunden, die für die Krebsbiologie und andere proliferative Erkrankungen relevant sind. CDKN2D wird daher häufig als zentraler Ansatzpunkt genutzt, um die Regulation der CDK4/6–RB‑Achse, seneszenzähnliche Zustände und stressabhängige Wachstumskontrolle zu untersuchen.

Das p19 INK4D/CDKN2D CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CDKN2D-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CDKN2D-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CDKN2D nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die p19 INK4D/CDKN2D-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CDKN2D-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der p19 INK4D/CDKN2D-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CDKN2D-Exone abzielen, die für die p19 INK4D/CDKN2D-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CDKN2D-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom p19 INK4D/CDKN2D CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom p19 INK4D/CDKN2D CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CDKN2D-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das p19 INK4D/CDKN2D HDR-Plasmid (h) und p19 INK4D/CDKN2D HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CDKN2D-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CDKN2D-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.