Particules Lentivirales d'Activation (h) p14ARF/p16: sc-400018-LAC

CDKN2A code deux protéines suppresseurs de tumeurs, p16INK4a et p14ARF, produites à partir de cadres de lecture alternatifs, qui freinent la progression du cycle cellulaire et coordonnent les programmes de sénescence. p16INK4a inhibe CDK4/6 afin de maintenir RB1 dans un état hypophosphorylé, limitant l’entrée en phase S dépendante d’E2F, tandis que p14ARF stabilise TP53 en antagonisant MDM2 et en favorisant l’arrêt du cycle cellulaire ou l’apoptose en réponse au stress oncogénique. Par ces connexions aux axes RB et p53, CDKN2A intègre les signaux mitogènes au contrôle des points de contrôle, aux réponses aux dommages de l’ADN et aux modifications transcriptionnelles associées au vieillissement. Une régulation altérée de CDKN2A est fréquemment liée à une prolifération dérégulée, à une sénescence compromise et à des phénotypes tumorigènes, ce qui en fait un nœud central pour les études mécanistiques en biologie du cancer et le contrôle du destin cellulaire.

Les particules d'activation lentivirales p14ARF/p16 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CDKN2A dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales p14ARF/p16 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CDKN2A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de p14ARF/p16. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CDKN2A ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.