P-Selectin/CD62P/SELP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400441

Übersicht

SELP kodiert für P‑Selektin (CD62P), einen induzierbaren Adhäsionsrezeptor, der in den α‑Granula von Thrombozyten und in den Weibel‑Palade‑Körperchen von Endothelzellen gespeichert ist und nach entzündlicher oder thrombotischer Stimulation rasch auf der Zelloberfläche exprimiert wird. Oberflächenständiges P‑Selektin bindet an PSGL‑1 auf Leukozyten und vermittelt so das Anheften und Rollen auf aktiviertem Endothel sowie Thrombozyten‑Leukozyten‑Interaktionen. Dadurch werden Adhäsionsdynamik und nachgeschaltete Signalwege gekoppelt, die die Rekrutierung von Leukozyten und die vaskuläre Entzündung unterstützen. Diese Achse greift in selektinvermittelte Adhäsionskaskaden, die Thrombozytenaktivierung und gerinnungsassoziierte Entzündungswege ein und prägt so die Endothelaktivierung und das Trafficking von Immunzellen. Eine fehlregulierte SELP‑Expression oder ‑Aktivität wird häufig in Modellen für Thrombose, Atherosklerose, Ischämie‑Reperfusions‑Schädigung und entzündliche Erkrankungen untersucht, bei denen das Zusammenspiel zwischen Thrombozyten, Endothel und Leukozyten zur Pathologie beiträgt.

Das P-Selectin/CD62P/SELP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SELP-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SELP-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SELP nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die P-Selectin/CD62P/SELP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SELP-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der P-Selectin/CD62P/SELP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SELP-Exone abzielen, die für die P-Selectin/CD62P/SELP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SELP-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom P-Selectin/CD62P/SELP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom P-Selectin/CD62P/SELP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SELP-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das P-Selectin/CD62P/SELP HDR-Plasmid (h) und P-Selectin/CD62P/SELP HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SELP-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SELP-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.