Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) P/Q-type Ca++ CP α1A: sc-404267-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) P/Q-type Ca++ CP α1A correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide P/Q-type Ca++ CP α1A Double Nickase (h) et le plasmide P/Q-type Ca++ CP α1A Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CACNA1A. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: P/Q-type Ca++ CP α1A Antibody (C-2): sc-390004
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) P/Q-type Ca++ CP α1A | sc-404267-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) P/Q-type Ca++ CP α1A | sc-404267-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CACNA1A code la sous-unité α1A formant le pore du canal calcique voltage-dépendant de type P/Q (CaV2.1), un médiateur majeur de l’entrée de Ca2+ dépendante de l’activité dans les neurones. L’ouverture du canal couple la dépolarisation membranaire à la libération de neurotransmetteurs et façonne les schémas de décharge en régulant les microdomaines calciques présynaptiques et l’exocytose des vésicules synaptiques. L’activité de CaV2.1 s’intègre à des voies de signalisation dépendantes du calcium, notamment la modulation dépendante de la calmoduline et des réseaux de kinases/phosphatases en aval qui ajustent la plasticité synaptique. La variation génétique ou le dysfonctionnement de CACNA1A est associé à des phénotypes de maladies neurologiques impliquant une excitabilité et une transmission synaptique altérées, ce qui étaye son utilisation dans des études mécanistiques du fonctionnement des circuits neuronaux.
P/Q-type Ca++ CP α1A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CACNA1A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CACNA1A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CACNA1A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CACNA1A.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.